DSS蛋白多寡聚体实验

1. 准备蛋白样品:用反应缓冲液稀释蛋白样品。
2. 准备交联剂：用DMSO溶解配制DSS溶液。
3. 在蛋白样品中加入DSS交联剂:交联剂终浓度为0.25～5mM。
4. 反应溶液室温孵育0.5-1小时。
5. 淬灭反应:加入20~50 mMTris终止交联反应，室温静置15分钟。
6. 洗涤样品，进行WB实验。

DSS蛋白交联实验是一种用于探究蛋白质相互作用的实验方法。下面是一些通用的实验步骤：

1. 制备样品：将待测蛋白质或蛋白质复合物加入样品缓冲液中，使其浓度在0.1-1 mg/mL之间。

2. 加入DSS交联剂：将DSS交联剂加入样品中，使其浓度在0.1-1 mM之间。

3. 交联反应：将样品在室温下孵育15-30分钟。

4. 加入还原剂：加入还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）破坏未反应的DSS交联剂。

5. SDS-PAGE：将样品进行SDS-PAGE电泳，并进行Western blot分析或直接染色。

需要注意的是，DSS交联剂的浓度和反应时间需要根据实验需要进行优化。此外，DSS交联剂对于不同的蛋白质可能会有不同的交联效果，需要进行实验验证。

操作步骤：

用反应缓冲液配制蛋白质溶液。

使用前准备交联剂：用DMSO或DMF配制DSS溶液。称量2mg DSS交联剂到微量离心管中，加入溶剂216μL，最终浓度为25mM。

向蛋白质样品中加入交联剂，如果蛋白质浓度大于5mg/mL，则使用10倍摩尔过量的交联剂。若样品小于5mg/mL，使用20～50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25～5mM。

将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。

加入淬灭缓冲液淬灭反应，终浓度为20~50 mMTris，或通过透析/脱盐除去未反应的试剂。

淬灭反应在室温下进行15分钟。

交联步骤：

1.使用DMSO溶解适量交联剂至适当浓度使用适宜的buffer将蛋白稀释或浓缩至适当浓度

2.加入适量交联剂，室温反应1h

3.加入2μL 1M pH 7.5 的Tris溶液，使溶液中Tris浓度为20-50mM，终止反应 ，室温静置15min

4.加入6倍体积的-20度下预冷的丙酮来沉淀蛋白。混匀，于-20℃下放置3h以上。

5.在离心机里以14,000rpm离心20 min。吸出大部分上清液，留下最后一滴，以免吸到沉淀。如果样品中有去垢剂则再用500μL -20℃预冷的丙酮清洗两次。

打开管盖，风干样品