如何确定WB蛋白的上样量

通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，可用裂解液稀释蛋白使总上样体积在10ul即可，勿用水稀释会改变PH值。

wb蛋白上样量一般在20ug到50ug之间，但具体上样量要根据目标蛋白的表达量来确定。

确定Western blotting（WB）的上样量需要考虑多个因素，包括蛋白的丰度、检测的目的、抗体敏感性以及蛋白质分离和检测方法等。

以下是一些常见的考虑因素：

1. 蛋白丰度：首先，了解您感兴趣的蛋白在样品中的丰度水平。如果目标蛋白是高丰度的，较少的上样量可能已足够产生可检测的信号。对于低丰度的蛋白，可能需要更多的上样量。

2. 检测目的：根据您对检测的目的，确定适当的上样量。如果您只需要确定目标蛋白的存在与否，较少的上样量可能足够。但如果您需要定量比较蛋白的表达水平，您可能需要在线性范围内使用更多的上样量。

3. 抗体敏感性：了解您使用的抗体的敏感性。某些抗体可能非常敏感，即使使用较少的上样量也能产生强烈的信号。但其他抗体可能需要更多的上样量才能检测到目标蛋白。

4. 分离和检测方法：考虑您使用的蛋白质分离和检测方法的灵敏度。某些方法可能需要更多的上样量才能获得可靠的结果。

常规是使用20ug的蛋白量，但是有些蛋白表达低，就需要增加上样量，没有上限。