WB显影整张膜都是黑的
audreyhepburn
这几次跑蛋白整张膜显影都是黑的，目的和内参actin都一样，不知道怎么回事，条件没有变化，和之前的一样，实在不知道哪里的原因了，重新提蛋白也是一样。
电泳:浓缩胶80伏，20分钟，分离胶120伏1小时。
转膜:300毫安，2小时
封闭:5%脱脂奶粉1.5-2小时
二抗:中杉金桥1:25000稀释
洗膜：TBST，5分钟，5次
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5 个回答
sswei
有帮助
可能的原因：
1.过量的抗体：使用过量的抗体可能会导致非特异性结合，从而导致高背景值。
2.不当的洗膜条件：使用过于粗糙或过于缓慢的洗膜步骤可能会导致高背景值。
3.抗体过时或受损：过时或受损的抗体可能会导致高背景值。
4.蛋白质降解：样品中蛋白质降解可能会导致高背景值。
5.膜过于湿润： 膜过于湿润可能会导致高背景值6.检测抗体非特异性结合: 如果检测的抗体不是特异的，可能会有非特异性结合导致黑色背景。
huarenqiang5
有帮助
第一可能封闭不彻底；第二可能TBST／PBST洗膜不完全。
dxy_xextz7w2
有帮助
控制TBST的ph值在7.4左右可以改善大片黑的情况，但是如果改善不了可能是抗体的问题
努力的人更幸运
有帮助
可能是封闭效果不好 脱脂奶粉容易结块 不可太多次重复利用
balalaLy
有帮助
可能是蛋白降解了，或者是TBST的ph值太高影响抗原抗体结合
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