吃朗姆葡萄
用的total的抗体,理论上条带应该是一样的,但是五个泳道只有一个正常,两个很淡,两个没有。之前跑过和预测的一样,现在重复不出来了。以为是转膜问题,立春红染色有三条泳道有蛋白。用同样的蛋白做了考染,也是只有一条泳道正常。为什么会出现这样的结果啊?因为蛋白质降解吗?
loveliufudan
由于你提到同样的样品在立春红染色中也出现了类似的结果,只有一条泳道正常,那么很可能是样品中的蛋白质含量或质量的问题导致的。以下是一些可能的原因:
蛋白质含量不足:如果样品中的蛋白质含量不足,那么Western blot检测时就可能出现很弱或无法检测到的条带。可以尝试增大加载样品的量,或者使用更敏感的检测方法。
蛋白质质量不佳:如果样品中的蛋白质质量较差,那么就可能会导致不同泳道之间的信号强度差异很大。建议使用高质量的样品,并在提取过程中加入蛋白酶抑制剂等,以避免蛋白质的降解。
balalaLy
这种情况一般就是蛋白质降解了。建议分装蛋白避免反复冻融。
毛利小五郎的徒弟
上样量是否正常,一定要保持上样量正常,其次保证蛋白不降解,必要时可以添加抑制酶
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