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WB中变性过的蛋白上样前需再煮吗?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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残容美

刚提的蛋白样品,加入5×loading buffer,100℃,10min变性,自然冷却后,冻存在负80℃冰箱。

疑问:已经变性过的蛋白,从负80℃冰箱拿出来后,在上样之前还要不要再100℃,煮3分钟?

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12 个回答

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是TTT

有帮助

一般不需要。

但是如果冻存时间太久,拿出来离心有沉淀的话可以再煮几分钟。

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残容美user-title

谢谢你

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来一起探讨

有帮助

不需要再次煮沸,只需恢复室温后,离心即可电泳

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残容美user-title

谢谢你

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sswei

有帮助

WB中变性过的蛋白上样前不需要再煮。

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残容美user-title

谢谢你

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z流沙z

有帮助

建议蛋白煮沸后立即放冰上冷却,从-80拿出后解冻即可上样。

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残容美user-title

谢谢你

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weiran0928

有帮助

不需要,煮沸目的是让蛋白质变性,改变其结构。冰冻不会使结构回复恢复正常,所以不需要再次煮沸变性。

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残容美user-title

谢谢你

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相似又互补

有帮助

可以不用,混匀后可以直接上样了

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残容美user-title

谢谢你

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NatureBios

有帮助

可以在上样前在煮一次这样让样本更均匀

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残容美user-title

谢谢你

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秋秋欣欣

有帮助

不需要,已经变性过直接拿出来用就可以

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残容美user-title

谢谢你

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balalaLy

有帮助

有些公司的loading buffer比较粘稠建议煮一下

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残容美user-title

谢谢你

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土井挞克树

有帮助

之前煮过可以不煮了,直接拿来用就可以

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残容美user-title

谢谢你

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且行且尽力

有帮助

已经100°C变性过不需要再次变性

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loveliufudan

有帮助

通常情况下,已经经过变性处理的蛋白样品在上样前不需要再次煮沸。这是因为变性处理会使蛋白质失去其原有的三维结构和活性,变成线性的、无电荷的多肽链。这些变性的蛋白质通常具有较高的稳定性,因此它们在冷冻保存时可以长期保持其变性状态。

因此,您可以直接从负80°C冰箱中取出已变性的蛋白质样品,并在室温下将其解冻并直接上样。不需要再次进行煮沸处理。

需要注意的是,如果您的样品在冷冻和解冻过程中发生了变化(例如出现颗粒物质或聚集物),则可能需要重新煮沸处理以确保蛋白质分子处于单个分散状态。

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