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HL-60和NB4细胞诱导分化问题

相关实验:IPTG 诱导蛋白表达实验

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DDDgreat

看到文献上大多都为1umol/L ATRA和1.25%的DMSO,没有提具体细胞数和对应培养时的加液量,现在买的是Sigma的10mmol/L的ATRA,那怎么配诱导培养基?

算下来1ml中只含0.01umol的ATRA。

不知道哪里出问题了,反正是一直没做成功。请不吝赐教哟~

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5 个回答

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dxy_bkhclvd4

有帮助

我们做下来是0.5 uM浓度诱导大概4-6 d就有效果了呀?

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汤姆卜丽波

有帮助

你可以做个梯度预实验按比例添加ATRA,找到合适的比例再大规模诱导

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sswei

有帮助

A丅RA浓度太低,需要继续添加。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以后续往培养基内添加atra的。添加到合适浓度

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loveliufudan

有帮助

在HL-60和NB4细胞诱导分化的实验中,ATRA和DMSO是常用的诱导剂。一般来说,细胞数和加液量会根据不同实验室和具体实验而有所不同,但一般要考虑到诱导剂的毒性和浓度对细胞的影响。

关于ATRA的浓度,10 mmol/L的ATRA确实是比较高的浓度,需要进行适当稀释才能达到常用的1 µmol/L。例如,将10 mmol/L的ATRA稀释1000倍,即将1 µL的10 mmol/L的ATRA加入1 mL的培养基中,可以得到1 µmol/L的最终浓度。当然,对于不同的细胞和不同的实验条件,需要进一步确定最适合的浓度。

此外,DMSO是一个有机溶剂,可以溶解ATRA并帮助其渗透到细胞内,但高浓度的DMSO也会对细胞产生毒性影响。常用的DMSO浓度为1.25%,也可以根据具体实验进行适当的调整。

最后,成功进行细胞诱导分化需要考虑到许多因素,包括细胞密度、诱导剂浓度和时间、培养基成分和温度等。如果实验一直不成功,可能需要进行一些优化和调整。

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