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ip酸洗脱 结果分析求助

相关实验:血红蛋白电泳

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amino123

酸洗脱用的是:甘氨酸盐酸ph2.4,洗脱时间做的梯度,请问大家这个是差在什么地方洗脱失败了呢?看起来有重链,但是没有我的目的蛋白

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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑有蛋白分解,所以你的目的蛋白看不到

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huarenqiang5

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你这个主要考虑是洗脱条件不合适导致的。

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loveliufudan

有帮助

以下是一些可能的原因:

pH条件不够酸性:甘氨酸盐酸的pH值为2.4,如果pH值不够酸性,可能无法完全洗脱目的蛋白。可以尝试将酸性条件调整为更低的pH值,或者增加洗脱时间或洗脱次数。

洗脱缓冲液成分不合适:酸洗脱缓冲液的成分和浓度需要根据具体的蛋白性质和结构进行优化。如果缓冲液成分不合适,可能会导致蛋白无法完全洗脱。可以尝试优化洗脱缓冲液的成分和浓度。

蛋白结构不稳定:一些蛋白在酸性条件下容易发生聚集或失活,导致无法完全洗脱。可以尝试优化洗脱条件,如降低洗脱温度或缓慢降低pH值,以减少蛋白的聚集和失活。

洗脱梯度不合适:洗脱梯度的选择需要根据蛋白的亲和性进行优化。如果梯度不合适,可能会导致目的蛋白在洗脱过程中无法完全从亲和柱上洗脱。可以尝试优化洗脱梯度的浓度和梯度步长。

综上,酸洗脱过程中可能存在多个因素导致洗脱失败,需要根据具体情况进行检查和优化。建议参考相关文献和实验室经验,优化洗脱条件和步骤,以获得更好的洗脱效果。

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