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成脂成骨诱导分装到48孔或24孔,地塞米松(DEX), 称取4mg地塞米松,溶于10mL 无水乙醇中,0.2μm无菌滤膜过滤后,分装到EP管中,配成10-3mol/L(1000X)储存液,-20℃冰箱保存。IBMX,100mg,溶于9mL 二甲基亚砜(DMSO)中,0.2μm无菌滤膜过滤后,配成50mmol/L的储存液(100X),-20℃冰箱保存。
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脂诱导液是一种用于体外诱导成脂细胞分化的培养基,常用于诱导分化的细胞包括3T3-L1细胞、人类脂肪干细胞等。脂诱导液的成分和配制方法可能因实验需求而略有差异,以下是一种常用的成脂诱导液配制方法,供您参考:
成脂诱导液配方:
DMEM高糖培养基 450 mL
胰岛素 10 μg/mL
丙酮 0.5 mM
甲基异丁基黄酮(MIB) 0.5 mM
青霉素/链霉素 1% (v/v)
步骤:
取出450 mL DMEM高糖培养基,加入1%的青霉素/链霉素,混匀。
加入10 μg/mL的胰岛素,混匀。
加入0.5 mM的丙酮和0.5 mM的MIB,混匀。
用0.22 μm滤器过滤,保存于4°C。
需要注意的是,脂诱导液中的成分和浓度可以根据不同实验的需要进行调整和优化。另外,对于不同的细胞类型,成脂诱导液的配方和使用方法也可能会有所不同,请根据您的实验需求和实验室的经验进行优化和调整。
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DMEM/F12(含有双抗)最后加到12ml+ 3%FBS 360ul (3次100ul+1次60ul)+ 1umol/l地塞米松120ul(用枪60ul加两次) + 5u/ml胰岛素 1.5ml(注射器抽)
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成脂分化诱导液工作液配制(10ml):
1. 取DMEM(L)8.72ml加入15ml离心管(BD);
2. 加1管Stock A(lml );
3. 加1管Stock B(0.1ml);
4. 取、管Stock C(0.1ml)溶解、加入0.01ml;
5. 加1管Stock E(0.05ml);
6. 加1管Stock F(0.02ml);
7. 加1管Stock D(0.1ml);
8.测渗透压。调pH7.2-7.4;
9. 0.22pm微孔过滤。 4°C贮存,一周内使用。
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