求助！蛋白挂不上离子交换柱

园子里的总结经验贴，常见的以下五个原因：

a. 超声功率不恰当：过大使得蛋白碳化，过小蛋白没有释放。建议调整超声功率或超声前添加溶菌酶增加细胞破碎率。

b. 缓冲液条件不合适：缓冲液中 EDTA、柠檬酸等金属离子螯合剂浓度不能过高，也可以适当提高 pH。

c. His 标签未充分暴露：在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂纯化或上游分子水平改变 His 的长度或位置使其暴露在蛋白表面。

d. His 标签未充分暴露：在蛋白中加入适量的尿素或盐酸胍等变性剂纯化或上游分子水平改变 His 的长度或位置使其暴露在蛋白表面。

e. 柱子过载：更换大体积柱子或多柱串联。

有可能是蛋白带电量不足，可以通过多做几个pH来确定最佳结合pH。

或者缓冲液中的盐浓度太高。有时候只考虑pH，而忘了裂解液中的盐离子，从而使目的蛋白不能结合。

也可能带电部位由于空间位阻，不能与交换基团结合。

把柱子再生一下试试，是不是用了有一段时间了