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求助|flag-beads是自带抗性吗?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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了不起的面包片

麻烦问一下做ip的时候flag-beads过夜,意思是能把带flag标签的蛋白拽下来是吧🤔 那相当于已经一抗敷过了吗?

我把煮完的珠子跑完电泳直接用二抗敷会有条带吗?

问题可能有点奇怪🙏但是我真的没找到该怎么做😢

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3 个回答

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冷泉港蛋白

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不能这样做。

1.flag-beads是flag抗体通过共价键和磁珠交联的。

2.捕获的蛋白和抗体之间是通过非共价键结合的,煮沸可以破坏非共价键和蛋白的高级结构,破坏不了共价键。

3.因此煮沸解离后:A蛋白释放出来了 B.抗体与珠子仍旧交联在一起 C抗体没有活性了,结合不了蛋白了

综上所述,做wb必须加一抗!

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Eason老歌迷

有帮助

对的,是这样理解的,做ip的时候flag-beads过夜,相当于已经一抗敷过了,跑完电泳直接孵二抗即可

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bamboopiggy

有帮助

对,flag-beads是自带flag抗体的beads,你只要binding完了,煮了以后,要先用flag的一抗去杂,加二抗显影就可以。

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