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买的抗体,说明书里图片显示目的条带只有一条,而自己做wb,却有多条带,什么原因呢?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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yjx2022

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6 个回答

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balalaLy

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有些时候是会这样,要调整一下抗体的浓度、稀释液、还有孵育时间。

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dxy_lgbve3zq

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要么是特异性不好,要么是浓度太高了可以适当降低抗体浓度。

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bamboopiggy

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可能是封闭不完全,也可能是抗体不特异,你试试增加封闭时间,降低抗体浓度

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养点鱼吃火锅

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 1抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带。2目的蛋白存在多个修饰位点,有的一抗还能结合其他位点。3蛋白样品降解,蛋白酶将目标蛋白分解成若干个蛋白,而这些蛋白同样可以被一抗识别。

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Eason老歌迷

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可能是抗体的特异性不够好,或者变性不充分,可以试试延长变性时间。如果仍有两条,那就需要换抗体了,换其它不同片段制备的抗体再试试。

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天一湖医者

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可能的原因会有很多,比如说样品分解了,抗体特异性差,实验本身条件有问题等。

可以做个内参看看是不是样品分解,或者换一个品牌的抗体试试,看看是不是抗体的原因。如果有单抗的话,建议使用单抗。孵育抗体还是建议在4℃下,摇床上孵育过夜(速度不要太快,如果是非圆周转动的上下摆动的摇床最好,这样可以减少非特异的结合)。

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