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原核表达蛋白诱导问题?

相关实验:IPTG 诱导蛋白表达实验

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心细北方

使用pGEX-4T-1载体表达蛋白,在未加IPTG与加IPTG诱导组无差异,然后换了pET-28a载体,不知道什么原因?

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4 个回答

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申东熙老伯

有帮助

如果未+IPTG与+IPTG组诱导结果没有差别的话,很有可能蛋白直接没有诱导出来,换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看,诱导温度和转速还有时间一般不会对诱导结果造成太大差异。

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bamboopiggy

有帮助

表达蛋白需要做预实验摸索合适的温度,转速以及合适的IPTG浓度。不同的表达载体,表达不同的蛋白,条件都是不一样的。

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Eason老歌迷

有帮助

我做的PGEX4T-1载体诱导IPTG浓度0.1mM,因为4T-1表达是可溶的,所以诱导的温度低一点比较好,我一般用20或者15度。具体条件自己摸索一下吧。

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天一湖医者

有帮助

这种情况还是比较少见的,因为你说的载体还是比较常见的,相比pGEX,pet还是有一些不同的,我想问一下,你采用化转的时候,转化子是不是非常多?

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