蛋白无活性

你是用什么方法判断活性的呢？裂菌后，活性跑到沉淀中去了，感觉是不是形成包涵体了？

建议你重新设计引物，在转到别的载体试一试。你说蛋白没有活性，为什么裂菌以后，沉淀有活性呢？

不是说你的蛋白失去了活性，而是很可能你的蛋白表达出来之后就没有活性。既然你的蛋白本来就含有二硫键，那么不需要在提纯的时候加2-巯基乙醇。