丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

蛋白无活性

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

user-title

dxy_v62ex2a3

求助各位大佬,在文献中查找到一个酶,想用来做后续研究,用NCBI查到的氨基酸序列,连载体pet28a转BL21,纯化后有目的条带,但是蛋白无活性。裂菌上清无活性,活性都在沉淀中,怎么搞啊

wx-share
分享

3 个回答

user-title

bamboopiggy

有帮助

你是用什么方法判断活性的呢?裂菌后,活性跑到沉淀中去了,感觉是不是形成包涵体了?

user-title

Eason老歌迷

有帮助

建议你重新设计引物,在转到别的载体试一试。你说蛋白没有活性,为什么裂菌以后,沉淀有活性呢?

user-title

天一湖医者

有帮助

不是说你的蛋白失去了活性,而是很可能你的蛋白表达出来之后就没有活性。既然你的蛋白本来就含有二硫键,那么不需要在提纯的时候加2-巯基乙醇。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序