wb只在顶端有结果

首先你膜的四周有黑边黑点，可能是封闭时候总撞击盒边导致的。你的膜上有很多非特异性条带，可能是你孵二抗的问题，孵二抗时间缩短一点，也可能是你选择抗体的问题，可以换一个特异性高一点的抗体。

有没有可能是抗体失效了，上面那个只是杂带

非特异性与蛋白结合，此种情况大多数情况是因为一抗特异性不好。更换一抗。

目的蛋白有多个修饰位点，有些一抗还能结合其他蛋白的结合位点。更换一抗品种。

蛋白样品降解，蛋白酶将目标蛋白分解成若干个蛋白，而这些蛋白同样可以被一抗识别。添加蛋白酶抑制剂。

是不是你的蛋白降解了，感觉marker还可以