府宅
样品量太大了,不论是胶还是膜,承受能力都有限度,这样跑胶蛋白会连成一条线,转膜时候,单位面积的膜能hold的蛋白量是一定的,相同分子量的蛋白太多,目的蛋白的转膜效率可能很受干扰,倒是建议你0.2的PVDF,降低蛋白上样量,提高一抗浓度
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试试降低上样量、降低抗体浓度和作用时间
汤姆卜丽波
背景太高了,存在非特异性结合,封闭时间长了
秋秋欣欣
你这要么是胶配的没凝好,要么应该就是样品降解弥散严重
天一湖医者
可能浓缩的效果都不是很好,浓缩胶浓度、长度等可以调一下,另外上样量可以少一点,上多了条带就很粗,也容易形成拖尾;内参抗体一般按1:5000来稀释
Eason老歌迷
背景有点脏,我觉得你可以用脱脂牛奶封闭的时候,现用现配,搅匀了取上清。你跑的什么,抗体的特异性高吗?你孵一抗二抗的时间是不是太长,现在天气热,可以适当减少二抗孵育时间
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