求WB大佬指导向下图这样子的蛋白条带改如何更改孵育条件，才能跑出来好看到的条带?

这种情况有可能是一抗浓度太高，导致抗体非特异性结合。

降低一抗浓度。

洗膜的时间和次数不够，导致其他蛋白没有清洗干净。

提高洗脱时间和频率。

封闭物用量不足。

提高封闭物浓度，孵育时保证封闭液完全浸没转印膜。

封闭物使用不当。

检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭。

封闭时间不够。

室温37度封闭1小时以上，4度封闭过夜。

一抗稀释度不适宜。

对抗体进行滴度测试，选择最适宜的抗体稀释度。

一抗孵育的温度偏高。

建议4℃结合过夜。

增加洗膜次数和时间，增加封闭时间，降低一抗浓度试试

你把条带的上面留的稍微宽一点 ，然后抗体加匀，洗膜的时候。少量多次

你的条带不明显，背景还有些脏。可以适当增加蛋白上样量，封闭不要过长，使用单克隆抗体更好。