蛋白纯化有杂带怎么办

如果是his标签的话，首先与填料结合时使用的buffer里可以加点咪唑这样可以减少特异性结合，其次洗脱的时候可以适当提高咪唑浓度，加强对杂蛋白洗脱，最后就是更换填料的类型。以上只是对his标签蛋白提纯的优化，希望有帮助。

建议可以采用不同的清洗方法来提高载量：
1） 较温和的清洗方法
为了去除沉淀或变性物质，可以尝试用2倍柱体积的6M盐酸胍或8M尿素洗涤，然后用5倍柱体积的缓冲液洗涤；为去除疏水结合的物质，可以尝试2倍柱体积1%的Triton X-100洗涤，然后用5倍柱体积的缓冲液洗涤。若改变不明显，可以选择下面更强烈的清洗方法。
2) 更强烈的清洗方法
首先用5－10倍柱体积的脱镍缓冲液（20 mM 磷酸钠, 0.5 M NaCl, 50 mM EDTA, pH 7.4）洗涤，迚行脱镍操作，然后用5－10倍柱体积的平衡缓冲液冲洗，最后用5－10倍柱体积的双蒸水冲洗；
随后迚行清洗操作，去除离子型杂蛋白，可以用5倍柱体积的1.5 M NaCl溶液，然后10倍柱体积的双蒸水冲洗；去除沉淀或变性蛋白，可以用1M氢氧化钠溶液，结合1－2小时，然后用10倍柱体积的平衡缓冲液和10倍柱体积的双蒸水迚行冲洗；去除疏水蛋白或者脂蛋白，可以用5－10倍柱体积的30%异丙醇溶液清洗，然后10倍柱体积的双蒸水洗涤；最后迚行生镍操作，用0.1M硫酸镍上柱，随后5倍柱体积的双蒸水和平衡缓冲液迚行洗涤，如需保存，保存在20%乙醇溶液即可。

如果用的镍柱纯化，通常这种情况下镍柱二次纯化效果也不会太好 因为杂带也是能够结合镍柱的

可以考虑二次纯化时改用别的办法 比如离子交换，参考GE的蛋白纯化手册

将上样蛋白稀释一下，过柱后，多洗几次试试。