各位前辈，WB蛋白定量怎样缩短时间呀？我总是1个多小时，太耗时间。

我用BCA定量的，每次只需要半小时，，需要注意以下操作，1蛋白浓度不要太高太低，稀释比例合适，不用二次稀释，2，标准曲线操作注意，r值要一次就超过0.999。3设置复孔，防止误差太大

可以用超微量核酸蛋白检测仪检测，快速便捷

如果你每次实验稳定，可以直接用一批试剂,只第一次做标曲，后面只做样品的bca就行，差不了太多。

蛋白定量法

开始之前我们有必要复习一下理论知识。蛋白定量至少有 5 种方法： BCA，Bradford，双缩脲法（Biuret 法），Folin 法（Lowry 法）和紫外分光光度计法。

BCA 法的原理是在碱性条件下，氨基酸将二价铜还原为一价铜与 BCA 形成紫颜色的络合物，测定 562 nm 的 OD 值，所以如果样本里有还原剂（比如 DTT）的话就会对 BCA 的结果产生干扰。

Bradford 法（考马斯亮蓝法）是在酸性条件下，加入考马斯亮蓝 G250 与蛋白质（主要是碱性或芳香族氨基酸）结合为蓝色化合物，吸光度值从 465nm 变成 595 nm，最后测定 595 nm 的 OD 值来计算蛋白质浓度。

双缩脲法或 Folin 法由于检测灵敏度不够高，早已被 BCA 或 Bradford 法所代替。

而紫外分光光度计法是利用氨基酸在 280 nm 处有吸收峰来定量，由于不同氨基酸吸收峰值略有不同，故在蛋白质成分单一的情况下使用佳，比如蛋白纯化后估测蛋白的浓度。

每个实验室都有各自的传统，在方法选择上青菜萝卜各有所爱，但绝大部分实验室要么用 BCA 要么用 Bradford 法进行蛋白定量。

下图简单总结了一下 BCA 和 Bradford 法各自的优缺点。

快速测蛋白法

显然，要想加快速度最好是选用 Bradford 法了。但是，Bradford 也存在一些问题，比如标准曲线线性相关性不佳，容易受 Triton，SDS 等去垢剂的影响等等。

好在我们都是站在前人的肩膀上，前人早已开发出去垢剂兼容型的 Bradford 试剂，性能优于常规 Bradford 法，比 BCA 法更快更方便。今天我们讨论的方法就是基于去垢剂兼容型的 Bradford 试剂来快速蛋白定量。不知道上哪里买的同学可以在丁香通上找找。

下图就是用 Bradford 法测出的标准曲线。虽然线性拟合不佳（R = 0.9667），但是二项式吻合度却非常高（R = 0.9994），可以说非常完美了。

下图展示了如何在 excel 中制作二项式标准曲线。

到此为止，前面我们担心的几个问题就已经全部解决了。第一，担心 Triton 或 SDS 的影响，我们用去垢剂兼容性的 Bradford 试剂

要想加快速度最好是选用 Bradford 法了。