western提取出来的蛋白质保存方法？

悬浮细胞样品，把细胞及培养液一起收集到15 ml或者50 ml离心管中，1 500 rpm离心3 min，弃去上清；加入10 ml 冷PBS轻轻吹打，1 500 rpm，4℃离心3 min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1 ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5 ml微型离心管，2 500 rpm（500 g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。

如果要保存的话就需要根据蛋白样品的特点来决定了。如果蛋白的浓度高，对蛋白酶也不敏感的话，可以直接分装冻存。但是一般情况下，还是会建议添加少量蛋白酶抑制剂，有必要的话添加甘油，分装冻存。

WB用的蛋白都是彻底变性的，因此不用考虑保持蛋白的活性或空间结构等，因此样品收集后，应尽快裂解并对总蛋白进行定量，然后加入loading buffer，放入－80℃保存。否则即使在－80℃下保存，细胞内的蛋白水平也会发生变化

最好养成习惯，提取出来以后，就煮变性，然后分装小份，-80/-20保存，别反复冻融，

蛋白样品放到-80℃也并不完全保险，虽然能存放久一些，但是最好不要冻融超过两次。蛋白浓度测定后，可以加入loading buffer 煮样，煮后可根据实验需要分装成小管，下次实验前拿出小管再次煮样即可。

蛋白样品保存短期-20℃，长期-80℃，虽然能存放久一些，但是最好不要冻融超过两次。提取蛋白后，可加入10%~50%的甘油作为保护剂，防止被冰晶损伤。

提取出来的蛋白可以-80保存半年以上，煮好的蛋白一般可以-20保存三个月以上