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分析蛋白性质性质和特点,根据实际应用目的制定抗体,有以下原则:
1)基本性质分析:查看蛋白质修饰情况(糖基化、羟基化、磷酸化、甲酰化等)、结构域特点、剪切加工等情况,如果蛋白质有后加工,应该尽可能选择一个完整“成熟体”区段进行分析。常用网站:(Http://www.uniprot.org)。
2)分析跨膜区分析:进行跨膜分析最常用的网站(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/),只需要将蛋白整个序列直接拷贝进文本框,即可直接分析。
3)同源性分析:通过NCBI软件分析其在同物种中与其他蛋白同源性,这就是所谓的特异性原则;同时要检索其与被免疫宿主的同源性,避免宿主“免疫耐受”。
4)亲水性/免疫原性分析:用DNASTAR软件进行分析预测。
5)稀有密码子分析:稀有密码子分析一般使用以下网站(http://people.mbi.ucla.edu/sumchan/caltor.html),只要将序列输入即可查看结果;连续出现两个或者两个以上的稀有密码子就有可能使表达变得极为困难。
天一湖医者
明确所需生产抗体的用途对抗原设计有很大的影响。例如:如果需要利用得到的抗体来研究目的蛋白的特定区域,如C端或N端,那么抗原序列的选择就应集中在这一区域;如果想要用抗体来研究一种特定状态下的蛋白,如磷酸化等,抗原设计的选择性更小了,只有选择该点位附近的合适氨基酸序列来设计多肽抗原。
一般说来最理想的抗原表位识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。因为在大多数的天然(自然)环境中,亲水区域倾向于集中在蛋白表面,而疏水区域常常被包裹在蛋白内部。那么,我们在设计的抗原的时候,如果选择这些具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点的区域的话,则有利于抗原产生与目的蛋白相同的抗原表位,从而生产出高亲和力,高特异性的抗体。
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制备多肽免疫,如果选择的多肽在6-8个氨基酸,成本上要便宜很多,抗原制备时间周期短,但一般多肽免疫时是需要衔接大分子量蛋白以增强免疫性
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