红格子一号
请问怎么提取植物总蛋白效率高呢,western检测用,,并且怎么能检测的时候不反白呢
bamboopiggy
你wb反白,就是因为你蛋白浓度高了,最好降低上样浓度试试。因为蛋白浓度高,辣根过氧化物酶反应剧烈,在你来不及显影之前,就把发光底物消耗光了,反而不能发光了。
天一湖医者
植物蛋白质的提取方法基本上有这几种:盐析法、有机溶剂法和等电点法。
1、盐析法
原理:盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐,使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出,而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。
2、有机溶剂法
原理:机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低,因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力,促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认专为与盐析相似,有机溶剂与蛋白质争夺水化水,致使蛋白质脱除水化膜,而易于聚集形成沉淀 。
等电点法
原理:在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
等电点时的许多物理性质属如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。
western出现反白可能的原因是
化学发光是个耗能过程,局部能量消耗过大,导致能量不足,也就发不出光了,所以条带反白。
降低一抗、二抗浓度,蛋白上样量也可以降低
未来9
总蛋白提取的话,可以用液氮碾碎了直接加loading buffer,煮个10mins就行了,然后上样,因为操作时间就几分钟左右,根本不用加任何蛋白抑制剂。
可以再查阅相关文献
红格子一号
应该按植物叶片重量加什么比例的loading buffer呢
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