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蛋白质印迹免疫分析时,蛋白质如何转膜?
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三明治夹心法,将滤纸 胶 膜 滤纸,制成三明治夹心的方式,然后分干转和湿转,看你的仪器。
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1. 将胶浸于转移缓冲液中平衡 10min。注意:若检测小分子蛋白,可省略此步,因小分子蛋白容易扩散出胶。
2. 依据胶的大小剪取膜和滤纸6 片, 放入转移缓冲液中平衡10min。如用PVDF 膜需用纯甲醇浸泡饱和 3-5 秒钟。
3. 装配转移三明治:海绵3层滤纸胶膜,3层滤纸海绵,每层放好后,用试管赶去气泡。切记:胶放于负极面(黑色面)。
4. 将转移槽置于冰浴中,放入三明治(黑色面对黑色面),加转移缓冲液, 插上电极,100V,1h(电流约为 0.3A)。
5. 转膜结束后,切断电源,取出杂交膜。
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一般采用的是湿法转膜,顺序为海绵、滤纸、胶、膜、滤纸、海绵。