Western Blot杂带太多的原因是

杂带多的原因——上样量过高，蛋白样本降解，蛋白本身有多个修饰位点，抗体未纯化，一抗浓度过高，洗涤不完全，封闭不好等都可能导致杂带产生。

原因有很多，1）封闭时间过短；2）一抗敷育时间过长或特异性不好；3）二抗不匹配

1、封闭问题，可以选择牛奶封闭，并且封闭时间可以延长，4℃过夜都是可以的。

2、抗体的非特异性过高，选择特意性强的抗体，单克隆抗体比多克隆抗体好。

3、蛋白质降解。

4、蛋白质亚型也一起曝出来。

上样量过高，太敏感，适当减少上样量。

一抗特异性不高重新选择或制备高特异性的抗体。

一抗不纯，要纯化抗体

一抗或者二抗浓度偏高，要降低抗体浓度。

目的蛋白有多个修饰位点（磷酸化位点、糖基化位点、乙酰化位点等），本身可以呈现多条 带。查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小。

目的蛋白有其它剪切本查阅文献或生物信息学分析可能性。

样本处理过程中目的蛋白发生降解加入蛋白 酶抑制剂；样本处理时在冰上操作。

可能是多克隆抗体，可选择更换为单克隆抗体。