E.coli表达His-tag蛋白有哪些操作注意事项？
蝌蝌啃蜡
将目的片段连接至表达载体pET-28a-SUMO并测序正确后，开始蛋白质的表达实验。
设置不同IPTG浓度（37℃，6h下，0mM，0.5mM，1mM，1.5mM，2mM，2.5mM，3mM），不同温度（1mM，6h下，15℃，26℃，37℃），不同诱导时间（37℃，1mM下，4h，6h，8h，12h），通过SDS-PAGE验证，结果不明显。还有什么条件可以改变呢？
如果已知核酸序列的大小，如何计算目的蛋白的大小呢？
3 个回答
岳努力岳幸运
1.蛋白纯化的条件：首先，看一看这个蛋白在文献中有没有纯化过，可以参考。如果从来没有人纯化过，除了提到的诱导剂浓度，温度和时间，其实裂解蛋白的buffer更重要一些，根据蛋白的等电点看一看酸碱，根据蛋白是否容易沉淀看盐浓度，根据蛋白是否稳定看蛋白酶抑制剂和还原剂…除了buffer还有wash buffer和elute buffer中咪唑浓度也挺重要的。
2.如何看蛋白分子量：把测序结果从起始到终止的序列贴到DNAMAN软件里，翻译一下，在软件里可以看到蛋白质信息，相比乘以110更准一些！
府宅
用碱基数除以3就是目的蛋白的氨基酸数，用氨基酸数乘以110就是目的蛋白的分子量，然后加上融合蛋白标签的分子量就是最后表达的融合蛋白加目的蛋白的总分子量。
如果要精确分析，那就是根据碱基序列去NCBI数据库搜索，应该是有准确的分子量在NCBI数据库里
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1.在4°C下储存的纯化液每次使用前必须脱气40分钟，以防止在纯化过程中凝胶进入。
2.加载前，应使用0.45μm过滤器过滤样品。
3.每种蛋白质都有其独特的特性。如果缓冲液中的任何条件（pH值、盐离子组成、盐离子浓度）不合适，则蛋白质沉淀缓冲液中各组分的浓度都不是恒定的。可根据不同蛋白质的特性进行适当调整.
