原核表达蛋白纯化问题

一些蛋白质或 DNA 与带有标签的目的蛋白发生了非特异性相互作用， 可以用低浓度的去污剂 （2%的 TritonX-100 或浓度不大于 0.5%SDS)洗涤样品 （上样洗脱时） 或增加洗脱液的盐浓度 （氯化钠溶液低于 2mol/L） 。柱子没平衡好，平衡缓冲液没加咪唑，平衡液 PH 不适合，缓冲液 pH 要与蛋白质 pI +/-1-2

1. 可以采用疏水层析纯化

2.可以换一种缓冲液超声和纯化

3.可以纯化后用离子交换、凝胶过滤。

如果有抗体，做个western blot判断下，是杂带还是降解片段；

如果是杂带，优先考虑优化你使用的纯化方案，如Ni柱，考虑延长washing buffer的时间和提高咪唑浓度，使用分辨率更好的填料；