相关实验：IPTG 诱导蛋白表达实验
dxy_cbomczd5
2022-03-09
重组质粒在BL21（DE3）中通过IPTG诱导表达不出来，但是测序结果是正确的，这种情况要重新做吗？
府宅
建议可以尝试改用酵母或者昆虫细胞表达。甚至直接用哺乳细胞表达。
如果一定要用BL21表达，我的建议是尝试用较低浓度IPTG在较低温度比如室温下表达更长时间，温和的表达条件运气好的话能稍微让蛋白质没那么容易misfold，不过不要抱太大希望。如果还是表达不出来，截短蛋白到70kDa左右。专注于一部分蛋白
dxy_gwrp7ndq
大肠杆菌表达分子量超过100kDa的蛋白很难表达，蛋白质太大了原核生物很难表达，就算表达出来了也无法保证正确折叠，可能因错误折叠而聚集在insoluble fraction里。
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