蛋白质测序结果多次失败，怎么提高实验的成功率？

在目前条件下，质谱很难100%给出肽段的序列，经常会丢失一些肽段，蛋白质磷酸化修饰也会抑制胰蛋白酶的酶解，并且磷酸化肽的含量较非磷酸化肽段的含量少很多，质谱对质谱分析仪磷酸化肽的响应就可能会被抑制。因此，要尽可能把非磷酸化肽段的含量降到。减少非磷酸化肽的方法有分馏、IMAC（固相化金属亲和色谱）和抗体结合。通过MALDI-TOF-MS测定肽段的分子量，根据所得肽段分子量比预计的分子量大80Da或其整倍数，判定是否存在磷酸化修饰。