求教RTPCR非特异性信号多的原因及解决办法？

whilt-shirt

2022-03-10

有帮助

1、引物为非特异性引物，优化扩增条件，可设置梯度Tm，摸索最佳的Tm值；2、引物浓度太高，适当降低引物浓度；3、可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体；4、模板有基因组污染，重新逆转录cDNA

dxy_gwrp7ndq

2022-03-09

有帮助

1)引物与靶序列不完全互补或引物聚合形成二聚体;

2)Mg2+离子浓度过高、退火温度过低及PCR循环次数过多有关;

3)其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增

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