提取的蛋白保存后没有凝固呈水状的原因
丁香实验
提取的MCF _7细胞的蛋白，提取之后变性放在_20℃冰箱，用的时候拿出来后有两罐没有凝固，是水状的是怎么回事啊，之前提的都凝固了的，提取的时候有两管离心之后有砖红色的东西。是什么原因如何解决？
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28 个回答
是小杨同学
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我觉得有可能是污染了，或者是冰箱温度的问题，建议放在-80°C冻存呢
lzy必有我师
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1.检查冰箱温度，可能是保存时冰箱门处于开的状态，温度高未抵达凝结状态，2，是提取过程没有处于低温，又污染其他杂质导致提取物呈现不一样的颜色。3检查离心管的洁净程度，离心机的温度，提取时的温度及时间 4没有凝固可能是裂解液的问题，建议新配置裂解液。。
dxyhsx123
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应该是存在污染，蛋白在提取时候，注意规范，适当增加一步漂洗。
内科小护士
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可能是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。
dxy_pggo2lp2
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1.可能是提取过程没有处于低温，又污染其他杂质导致提取物呈现不一样的颜色。可以检查离心管的洁净程度，离心机的温度，提取时的温度及时间
2.没有凝固可能是裂解液的问题，建议新配置裂解液。2.检查冰箱温度，可能是保存时冰箱门处于开的状态。
JCorona
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极可能是污染了，很多溶质都可能导致溶液的冰点降低，所以-20℃无法凝结。砖红色沉淀可能是铜离子或者铁离子导致的
医往情深丁香园
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在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。
dxy_qkedgrg7
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应该是有杂质，正常来说蛋白放-20是可以很快凝固的，如果还是水状并且有红色，可能是细胞提取时没洗干净，培养基的残留之类的
vae1476
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细胞裂解前要用pbs洗干净，裂解要充分，怀疑引入杂质了
ZZDX-YILILI
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1.当时提取完蛋白质加入loading budfer的时候是否涡旋混匀了。
2.看到你说当时提取的时候有砖红色，怀疑是不是没有清洗干净培养基，影响后续的裂解。
dxy_bq4uxnd
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变性蛋白一般放在-80℃冰箱比较保险，有两管没有凝固，其他凝固了，说明蛋白提取的过程应该是没有问题，离心过后有砖红色沉淀，可能是操作时污染了。
一支肾上腺素
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可能是由于温度没有达到，把温度调到4度，再试一次。
水深先试浅
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细胞量多吗，怕你蛋白浓度太低了，造成的
dxy_h7vcp8v3
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没有凝固，可能是因为-20冰箱时常有人开关，温度一直变动，因此未凝固。其二可能是因为你拿的时候，别人吧-20冰箱打开了，造成你的样品未冻实。建议，蛋白保存前用液氮速冻，然后冻于不经常开关的冰箱。。出现砖红色，其一如果蛋白浓度过高，出现红黄色；其二自己蛋白本身显砖红色。其三，提取过程中杂质污染。可能纯化柱带了以前纯化的红色蛋白。建议，换新纯化柱进行实验，后续进行浓度检测。进行跑胶检测。
dxywode
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通常会将该溶液进一步稀释后再放在4℃保存，待1周内用完。如进行稀释，必须遵照下面第4步的方法，即需用含载体蛋白的溶液进行稀释，否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降，细胞因子或重组蛋白的总活性则大为减弱。
dxy_pni5ki46
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砖红色沉淀不知道会不会是培养基中生成了氢氧化铁或者别的金属化合物。样品不凝固不知道是不是样品放的方式有问题，可能没有完全降下温度，也可能是溶液中有什么物质的影响吧，不知道有没有乙醇或者甘油之类的东西
dxy_w4oj7yoe
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不知道你所说的没有凝固呈水状具体是什么样的，还是说你指的是在-20℃没有冻住，保存样品可以直接用液氮速冻放-80℃，保存时间更长，样品也更稳定。颜色变化可能是ph变化，可以加大缓冲试剂浓度，比如从20mM Tris 提高到 50mM Tris
jey1235
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提取的是细胞总蛋白吗？如果是，看你用的变性的buffer是否含有较高浓度的甘油，如果是，没有凝固是正在的，那就没有关系的。砖红色沉淀完全是buffer里边是不是有pH敏感的试剂，应该没有大影响，可以直接取出。
dxy_4uyyu09r
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水状？加了甘油？还是样品的问题，有红色就是ph值太酸了，建议换新的loading试试，如果还是样品的问题，可以调整下ph值后再煮沸实验。
zxb597
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可能过期变质，可能没有达到出缸时间就提前取出了。
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