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请问, 200kD的蛋白的转膜条件是什么?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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qidi0126

请问,200kD的蛋白的转膜条件是什么?电转液的配方是什么?和小分子的一样吗?转膜的条件具体是什么?湿转的条件是恒压好些还是恒流好些?请各位大侠指点~!
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3 个回答

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小太爷1988

有帮助
100V 2小时足够了,转膜液70%水,20%甲醇,10%10x转膜液(电转液),至于恒压与恒流哪个好,因人而异吧,各有各的喜好,恒流产热比较少,我习惯恒压转,但是因为电流会随着转膜时间的增长会加大,所以产热会多一些,不过一般没什么问题,把转膜的盒子包在冰里就好,或者有条件觉得话,放在冷室里就行,一般问题不大;如果你想恒流的话250mA2.5小时-3小时应该就可以了。至于小分子的,看你的目的蛋白有多小了,一般恒压100V 1.5小时都可以报出来,如果小于20kDa的蛋白建议使用PVDF膜。
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linhixxx

有帮助
正在转230的,湿转:120mA恒流转3小时,效果不错,没有杂带,ps要用伯乐自带的三明治纸夹住膜和胶
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weiquanxie

有帮助
我转过210kd的蛋白,转膜液配方(1L):Tris :3.025g,glycine:14.4g加入约900ml水溶解后加入100ml甲醇至1L即可。PVDF膜(0.45uM),湿转:350mA恒流转60min即可。
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