WB的内参一直做不齐是什么原因？

不同样品选用内参要注意考察，有些内参蛋白会随着发育阶段，体内环境等因素而变化。考虑用总蛋白作为均一话标准是行之有效的方法。

你的这个问题是非常常见的，就算在实验室专业做WESTERN的人员，也会遇到内参不齐的问题。单独上样可以出现，可以排除蛋白本身的问题，但混合一起加时却跑的不齐，最大的可能就是胶的问题，胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。在就是抗体孵育问题，不知你是用孵育盒，还是用封膜孵育，一定要保证膜与抗体充分接触，保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的，注意混合比例，祝楼主早日跑出理想的条带。

能否试试换一换点样的胶孔位置，同时考虑配胶的问题。还有问题是，楼主用的是什么显影方法