求高手指点 WB 曝光为什么出现反影？

我做的分子在 35-45 之间，一抗 1:5000，3%milk，二抗1:12000，封闭室温 1h，5%milk，结果整张膜都是黑的，之前试了几个一抗条件也是如此。看有人用复方配一抗，于是改进：一抗1:5000，3%milk+0.4%gelatin，室温封闭 2h，结果其中一个因子整张膜都是黑的，但是目的条带的地方却是亮的，就是跟该有的结果是反过来的，这是不是叫反影？另外，另一个分子，背景不那么深，但是也同样出现反影。我们抗体是 Abcam 的，按理来说应该是很好的抗体。请问，有人出现这种情况吗？该怎样改进？还有，有人用 gelatin 封闭过吗？浓度是多少，用什么配的啊？求高人指点，大家给个建议。