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为什么我转完膜后,膜上没有任何条带,连 marker 条带都没有?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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doctorsdf

RT,具体可能是哪些原因导致的?感谢!
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9 个回答

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木恩木恩木恩

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看一下电极有没有弄反。
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小凌33

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最大可能是膜反了导致电机错了 直接就没转上去,不妨染色看看有没有。仅供参考。
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tobepan

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连marker都没有? 1.考虑转膜液的问题,是否过期失效?是否加甲醇?是否在低温条件下进行转膜? 2.考虑转膜装置的问题。黑面在下,依次是海绵垫,滤纸,凝胶,PVDF 膜(膜一定要和胶贴好,不要有气泡),滤纸,海绵垫。 3.转膜条件设置是否合理。我们实验室条件是 200mA,90min。供你参考。
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牧云1983217

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marker 都没有?影响因素很多,不过最可能的是转过了,或者是胶和膜放反了。
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koushiun

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WB 只要有蛋白就不会出太大问题。很可能是你的蛋白没有表达出来或者丰度极低。
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可乐zhou

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1.膜和胶可能放反了。 2.你用的 marker 是预染的还是非预染的?如果是非预染的话转膜完是看不见marker的,只有在考马斯亮蓝里染过才会显出来。 3.是湿转还是半干转?注意看一下配方和阴阳极。 4.转膜时间是多长?如果湿转液里SDS浓度过高,转膜时间过长的话可能会造成蛋白和 marker 的丢失,看一下膜侧的滤纸上有没有 marker 残留。 总之,WB 是一项需要很细心认真,注重操作的实验,做好每一步。
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王建勇

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有很多原因的,你的转膜的条件是否和别人一样,而别人是做得出来的。最好有人能看你做一下。想转膜液的成分,少加了甲醇。或者如果你用 PVDF 膜的话事先要用甲醇浸泡。电压的设定也有可能出错。电极放错也可能。
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8711661

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电转仪正常否?电转液对否?用的膜是否需要特殊处理下呢?
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没有名字

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首先应注意胶、膜的正负极摆放,然后注意调整转膜电压及转膜时间,再好好试一次,应该没问题的。
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