请教用加尾法进行microrna的反转录和qpcr

你好.可以分享一下u6的引物序列嘛

首先，您提到进行了负模板对照（NTC），发现存在引物二聚体的情况。这可能会导致假阳性的信号。您已经尝试稀释cDNA和调整引物浓度，但没有看到改善。这种情况下，考虑使用非反转录控制（NRC）来评估反转录过程中的污染情况，以确定是否存在其他因素导致结果不准确。

此外，您可以尝试以下优化步骤：

1. 确保您的实验条件和PCR反应体系是正确的，包括反应缓冲液、酶的浓度、模板量等。参考相关文献或厂家推荐的实验方案进行操作。

2. 检查反应温度和退火温度的优化，可能需要尝试不同的温度梯度。

3. 检查引物的设计和序列，确保引物与目标microRNA的互补性良好，并且没有二聚体倾向。

4. 考虑尝试其他反转录和扩增方法，例如使用不同的反转录酶或qPCR引物。