髓核干细胞sirna转染

转染过程

⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。

注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

⑵取1ul的EntransterTM-R4000，然后加入24ul无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25μl。室温静置5分钟。

⑶将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

⑷将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。

可以借鉴一下这篇文章《骨髓间充质干细胞的转染》

一、试验材料：

1、LB液体造就基：称取蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调整PH到7.5，加去离子水定容至1L，高压灭菌20min.

2、LB平板造就基：LB液体造就基中按1.5%的浓度参与琼脂，加热溶解，进行高压灭菌。取出后趁热在无菌条件下，倒入无菌的平皿中，每套平皿中参与12-15ml，凝固后倒置，4℃冰箱保存备用。

3、0.1mol/lCaCL2溶液：称取1.1g 五水CaCL2用双蒸水溶解，定容到100ml.高压灭菌20min。

下面是一般的骨髓间充质干细胞转染的步骤：

准备质粒和转染试剂。根据需要表达的基因，准备相应的质粒DNA，并用纯化试剂盒进行纯化。此外，根据转染试剂的不同，也可以选择不同的转染试剂进行转染。

转染试剂与质粒DNA的混合。根据不同的转染试剂，将质粒DNA和转染试剂按照说明书上的比例进行混合，通常需要在室温下静置一段时间。

细胞处理。将骨髓间充质干细胞移植到细胞培养皿中，并培养到约 70-80% 的密度。在转染前，将细胞培养基更换为不含抗生素和血清的培养基，并将细胞培养温度调整到 37℃。

转染。将混合好的转染试剂和质粒DNA缓慢地加入培养皿中，使其与细胞均匀混合。根据不同的转染试剂，具体的操作方式可能会有所不同。

培养。转染完成后，将细胞培养基更换为含有抗生素和血清的培养基，并将细胞继续培养。根据不同的实验需求，可以选择不同的时间点进行下一步实验。

需要注意的是，不同类型的骨髓间充质干细胞可能对转染试剂的敏感性不同，因此在进行转染前最好先进行小规模的试验来确定最佳的转染条件。此外，为了确保转染的稳定性和可靠性，可以使用荧光标记的质粒 DNA 和细胞以检测转染效率和稳定性。