扩增3UTR区域，做了很多很多次了，琼脂糖电泳一直无条带，求大佬帮忙看看

从cDNA上扩一段3UTR区，引物设计是在ncbi上设计的，比对过后也是目标基因，并且引物在mRNA和基因组DNA上都只有单一结合位点。

可是退火温度做了梯度，一个没有条带，一个有很微弱的多条带（c DNA也验证了没问题）实在不知道原因在哪里了，求大佬帮忙看看