体外转录，模版DNA必须是双链吗，单链DNA可以作为模版吗？

是以一条含有启动子的链为模板的，但是转录是应该还是要双链

体外转录，模版DNA是单链，而不是像DNA复制那样可以双链！

看你的实验目的，设计在设计转录模板时，必须确定需要的是正义链还是反义链转录本。若RNA是要用作与信使RNA杂交的探针（例如：Northern blot、原位杂交、核酸酶保护实验等），则需要互补的反义链转录本。反之，当进行表达、结构或功能研究时，或使用人工正义链RNA来构建RNA定量的标准曲线时，则需要正义链转录本。

DNA模板上的RNA聚合酶启动子序列+1 G是转录产物中的第一个碱基。为了获得正义RNA，编码链的5’末端应当与启动子的+1 G相连，或正好处于下游。若要转录反义RNA，则是非编码链的5’末端应当与+1 G相连。若插入片段是在载体中，则应当在启动子和需转录插入序列的下游对载体进行线性化