佚名1896
现在在做Western Blot ,内参是gapdh,目标分子mmp13,制胶孵育抗体都是蛮好的,但为什么条白出来是白的,非常苦恼,请求大佬解答
bamboopiggy
你说的是空心的吧?是蛋白浓度太高了,辣根过氧化物酶反应剧烈,底物消耗太快,来不及显影,荧光已经淬灭了,试试降低上样浓度。实在不行再降低抗体浓度。
whilt-shirt
有可能是没封闭好,或者抗体敷育不完全
天一湖医者
目的蛋白没转到膜上,或者你根本没分离出来
探针有问题
未来9
如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
a) 二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
b) ECM底物中本身含双氧水,不稳定,见光或温度高时易失活;现配现用。
c) ECL底物没覆盖到相应位置;
d) 二抗时间过期,或平时使用不当导致二抗失活。
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