丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?

user-title

王建勇

我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
wx-share
分享

3 个回答

user-title

mybiosciences

有帮助
转染率测了吗?如果载体携带荧光蛋白,可以直接用流式检测转染率,看看问题是不是出在这一环节
user-title

kongguli

有帮助
应该先做REALtimePCR检测一下吧,如果确定敲低了,然后再做蛋白水平的检测,而且公司做的siRNA应该会说清楚支持什么水平的检测吧,可能他只保证real time 的检测
user-title

alaling

有帮助
siRNA的直接作用(如果有作用的话)是抑制目标mRNA的表达,所以你应该检测DMT1的mRNA的表达情况,如果mRNA也没有低表达,说明该siRNA设计的不行。你检测蛋白的表达不太科学,毕竟蛋白和mRNA之间还有一道“翻译”的墙隔着,两者的上下调并不一定完全一致。
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序