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微流控芯片PCR实验出现阳性液滴分布不均匀的原因可能有:
1. 芯片材料对核酸的吸附作用。一些材料表面带正电荷,会吸附带负电荷的DNA,导致液滴内核酸分布不均。
2. 核酸的表面活性剂吸附在微孔壁。造成核酸分子无法均匀释放入液滴。
3. 芯片表面处理不当,存在吸附核酸的部位。
4. 核酸样本制备不完全,存在聚集。
对策:
1. 选用耐酸、抗吸附材料,如硅硝胶芯片。
2. 在PCR反应前,用BSA或Tween 20预处理芯片,充分包覆芯片表面,防止吸附。
3. 优化芯片表面处理工艺,减少吸附部位。
4. 核酸提取要充分散解,避免聚集。
综上,优化芯片表面以及样本制备,可以有效减少核酸在芯片PCR中的吸附失活。
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