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两种细胞样品同一基因qPCR溶解曲线的Tm值不一致,可以进行两组定量分析吗?

相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

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蝶恋NRMD

两组峰类似如图,Tm值相差1.3左右,数据还可用于两种细胞这一基因表达的对比分析吗?

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3 个回答

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晓雨知春来

有帮助

建议选择具有较为稳定的Tm值的引物。

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loveliufudan

有帮助

如果两种细胞样品在同一基因的qPCR溶解曲线中显示的Tm值不一致,可以进行两组定量分析,但需要注意以下几点:

1. 确认引物特异性:确保所使用的引物对目标基因具有特异性,而不会与其他基因产生交叉反应。引物的特异性可以通过序列比对和引物设计验证等方法进行确认。

2. 目标基因选择:在进行定量分析时,建议选择具有较为稳定的Tm值的引物。如果两个细胞样品的Tm值差异较大,可能需要重新设计引物,确保引物在两个样品中都能够产生稳定的Tm值。

3. 校正浓度差异:如果两个样品中的目标基因含量存在差异,可以通过使用内参基因或标准曲线法来校正浓度差异。内参基因是稳定表达的基因,可以用于相对定量分析。标准曲线法使用已知浓度的标准品来生成标准曲线,进而估计未知样品中目标基因的浓度。

4. 重复实验:为了提高结果的可靠性,建议进行重复实验。重复实验可以帮助验证结果的一致性,并确定差异是否具有统计学意义。

总之,尽管两个样品的Tm值不一致,但仍然可以进行两组定量分析,但需要在实验设计和数据解释过程中注意上述因素,以确保结果的准确性和可靠性。

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dxyc42u

有帮助

最好不要用,再结合扩增曲线看看是否出现了非特异性扩增

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