菌液PCR

有可能是连接失败你转化的时候菌液带上了片段，那挑单克隆就有可能会挑到

以下是可能导致这种情况发生的几个可能原因：

1. 细菌发展的时间：摇菌的时间可能不足以让细菌在液体培养基中扩增到足够的数量。摇菌的时间通常是根据细菌种类和培养条件而定，您可以尝试延长摇菌时间，例如摇菌过夜。

2. 抗生素浓度：请确保您在液体LB培养基中添加了足够的抗生素（如ampicillin）以保持选择压力，防止非转化菌的生长。请确保抗生素的浓度适当，并且没有过期。

3. 培养基配制：请确保您正确配制了液体LB培养基，包括正确的成分比例和pH值。确保培养基的质量和新鲜性。

4. 培养条件：注意培养条件，如温度、摇床速度和培养瓶密封性。这些条件对于细菌的生长和扩增至关重要。

关于引物设计，如果您在菌液PCR中观察到了目的条带，这表明引物设计可能是有效的。引物的特异性和有效性通常可以通过测序验证。

综上所述，您可以尝试延长摇菌时间、检查抗生素浓度、确认培养基配制和优化培养条件，以提高细菌在液体培养基中的扩大培养效果。此外，定期检查和验证实验室设备和试剂的质量和有效性也是很重要的。

考虑是引物特异度不高所以摇不出来，建议更换特异度高的引物