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PCR扩增曲线为负数,并且到0就不上升了,什么原因呀,求大神们指导,急。。。。

相关实验:反向 PCR (inverse-PCR)

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胖胖胖胖皓

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3 个回答

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土井挞克树

有帮助

说明仪器设置的不对,或者你的样本根本没有进行扩增

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sswei

有帮助

可能是没有扩增,检查标本是不是降解了。

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loveliufudan

有帮助

PCR扩增曲线到一定程度就不再上升可能是由于以下原因:

反应物耗尽:PCR反应需要足够的模板DNA、引物和酶来进行扩增,如果其中任何一个反应物不足,就会导致扩增曲线的停滞。可以尝试增加反应物的浓度或优化PCR反应条件。

产物抑制:PCR反应过程中,已扩增产物的存在可能会抑制新的扩增,导致扩增曲线停滞。可以尝试将产物进行稀释或优化PCR反应条件以减少产物抑制。

PCR反应过程中的技术问题:例如,PCR反应管的密封不良、温度梯度不均匀、扩增酶质量不佳等,都可能影响PCR反应的进行。可以检查PCR反应过程中的实验技术,确保实验条件正常。

样品质量问题:如果模板DNA质量不好、含有PCR抑制物质、浓度过低等,都可能导致PCR反应曲线停滞。可以重新提取模板DNA,确保质量优良,或尝试优化DNA提取和PCR反应条件。

综上,需要根据实验情况仔细分析,找出导致PCR反应停滞的原因,并采取相应的措施解决问题。

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