pcr求助

大概有以下可能：

(1)反应的循环数不够：一般要在35个循环以上，但是过多的循环次数可增加背景值。

(2)检测荧光信号的步骤有误：SYB-Rgreen法（SG法）采用的是72延伸时采集荧光信号，Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。

(3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性，若是电泳条带呈弥散状，可考虑重新合成引物或探针。

(4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。

(5)模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

(6)序列或者引物有误：检测样品中不含有待检测基因。

第一目的基因设计的引物有问题，导致目的基因测不出CT值；

第二没有做模板梯度稀释的预实验，导致稀释倍数过大，或者目的基因本身丰度较低，就导致测不出CT值。

第三：定量设置出现问题，目的基因的CT值没有显示出来。

考虑还是目的基因的引物问题，重新设计引物试一下