重叠pcr连接长片段(7kb左右)一直做不出来有没有大佬可以请教一下

土井挞克树

2022-11-07

有帮助

在做重叠延伸PCR时，要注意一个关键的问题，如果你用Taq酶话，会在扩增产物的3‘端多一个A尾，如果你其他条件都没问题的话，就要考虑一下是不是这个A尾影响了碱基配对的问题，可以换用平末端酶（如pfu酶）一试。

huarenqiang5

2022-11-06

有帮助

1、DNA模板质量问题，没有提取到含有足够量目的基因的完整模板，如发生这种情况应该提取新鲜的样本或者对核酸提取使用比较温和的方法来降低提取过程中的损伤情况。

2、本身基因型具有差异性的样本导致扩增失败，设计有缺陷的引物，会出现二聚体、非特异性扩增甚至扩增失败，可以选择设计相对保守的引物。

相关产品推荐

靶基因重测序多重PCR捕获建库试剂盒(Hi-Primers)

￥300

全自动医用PCR分析系统Gentier 96E/96R

￥200000

2×T5 Super PCR Mix（PAGE）/PAGE专用PCRmix，极速延伸（5~10s/kb）/擎科生物TSINGKE

￥395

2×T5 Super PCR Mix（Colony）/菌P专家，极速延伸（10~15 s/kb）/擎科生物TSINGKE

￥395

GoldenStar® T6 Super PCR Mix（1.1×）金牌 Mix（green）/PCR系列/即用型，超高保真度（Taq的30倍），极速延伸（5~10 s/kb）/擎科生物TSINGKE

￥375

重叠pcr连接长片段(7kb左右)一直做不出来 有没有大佬可以请教一下