bamboopiggy
touch down pcr本来就是为了更好的得到实验结果才加的pcr程序,不需要优化,一般你把 touch down的annealing temperature 设置从55-65之间,就可以。如果说你的primer的Tm值太高,也可以适当的把annealing temperature的范围提高一些
Eason老歌迷
退火温度的设定是根据自己的情况可以调整的,比如说,60-50这段温度范围可以设5个温度值,60,58,56,54,52,50。前四个每个温度2个循环,最后一个再20-25个循环。我的温度设定一般是上五度和下五度。