请问普通PCR一般退火温度大致在多少范围？是否可根据实际情况微调？

在模板变性后温度快速冷却至40℃～60℃(某个退火温度 )的时候，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞，这就使PCR后期的过程成为可能。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。

退火温度以55度为起始，一般是primer的low temperature-5,要是不低于55，就可以用

一般在50-65度，或者70度做两部法PCR。可根据模板含量，GC值进行相应调整

PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.

一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右。另外,也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。