细菌质粒构建如何确保准确

保存质粒用的菌宿主需要小心选择，因为有不少菌株已经工程化，有些缺失了某些纠错系统，有些则还保留着重组体系。典型的是最好不要用表达载体保存质粒，如BL21(DE3)就不适合，由于其没有缺失重组酶RecA。具体可以看各菌株的基因型。常用于保存质粒的菌株有DH5a, XL1-blue, TOP10等。

目前构建质粒的过程主要分为以下几个步骤：1.引物设计，2.PCR，p出目的片段，3.酶切，4.连接，5.转化，涂板，6.挑菌，小提，7.酶切验证并测序，8.质粒中提。质粒载体的制备既可以选择单酶切也可以选择双酶切，一般推荐使用双酶切。其实目的就只有一个，尽量使载体的末端具有特异性，防止自连。

是，如果blast在种水平上找到很多，可以认为是属水平上的保守序列。

不完全可以，还要进一步验证才行