天一湖医者
反应循环数不够
一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45循环), 但高于45个循环会增加过多的背景信号
检测荧光信号的步骤有误
一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号
引物或探针降解
可通过PAGE电泳检测其完整性
模板量不足
对未知浓度的样品应从系列稀释样本的zui高浓度做起
模板降解
避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况发生
目的基因在组织中不表达或者表达量低
尝试其它组织
bamboopiggy
mix配错了,里面少加了引物,样品没有加到孔里,机器坏了,目的基因的丰度太低
未来9
如果在荧光定量PCR检测报告页面出现了ROX的荧光值 为0的情况,很可能是使用了不含ROX 试剂而系统参数中未做修改所造成,及时在分析设置中将Passive reference dye的ROX 改成None,再重新分析即可正常显示。有些没有ROX 校正的PCR 仪中也较容易出现此类问题。
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