PCR退火温度应该怎样设定？

根据我的经验, 如果上下引物Tm值差不多的情况下,退火温度设定比Tm 低三度就可以。但如果两者想差比较大,差5度以上吧,有两种策略,取中间温度,或者进行梯度PCR. 梯度PCR很靠谱的,他的温度设定: 低温=低的Tm-3 高温=高的Tm+3。

梯度PCR 你一般拿不到条带的话 就要考虑引物和模板的问题了。

现在，我们仍然在改变退火温度，请问应该上调温度还是下调温度？上调温度和下调温度在性质上有什么不同？
——47度有点低了，如果不知道哪个温度合适最简单的做法就是先选Tm值作为退火温度，做不出就在Tm值上下5度范围调整，出现非特异扩增就提高退火温度。